Знаймо

Додати знання

приховати рекламу

Цей текст може містити помилки.

Гістологія



План:


Введення

Гістологія (від греч. ίστίομ - Тканину і греч. Λόγος - Знання, слово, наука) - розділ біології, який вивчає будову тканин живих організмів. Зазвичай це робиться розтином тканин на тонкі шари і за допомогою мікротому. На відміну від анатомії, гістологія вивчає будову організму на тканинному рівні.

Гістологія людини - розділ медицини, що вивчає будову тканин людини.

Гістопатологія - це розділ мікроскопічного вивчення ураженої тканини, є важливим інструментом патоморфології ( патологічна анатомія), так як точний діагноз раку та інших захворювань зазвичай вимагає гістопатологічного дослідження зразків.

Гістологія судово-медична - розділ судової медицини, що вивчає особливості пошкоджень на тканинному рівні.


1. Джерело тканини

Гістологічне дослідження тканин розпочинається з хірургії, біопсії або аутопсії.

2. Історія

Гістологія зародилася задовго до винайдення мікроскопа. Перші описи тканин зустрічаються в роботах Аристотеля, Галена, Авіценни, Везалия. В 1665 році Р. Гук ввів поняття клітини і спостерігав в мікроскоп клітинну будову деяких тканин. Гістологічні дослідження проводили М. Мальпігі, А. Левенгук, Я. Сваммердам, Н. Грю та ін Новий етап розвитку науки пов'язаний з іменами К. Вольфа і К. Бера - основоположників ембріології.

У XIX столітті гістологія була повноправною академічною дисципліною. У середині XIX століття А. Келлікер, Лейдінг та ін створили основи сучасного вчення про тканини. Р. Вірхов поклав початок розвитку клітинної та тканинної патології. Відкриття в цитології та створення клітинної теорії стимулювали розвиток гістології. Великий вплив на розвиток науки зробили праці І. І. Мечникова і Л. Пастера, які сформулювали основні уявлення про імунній системі.

Нобелівську премію 1906 року в фізіології або медицині присудили двом гістологам, Камілло Гольджі і Сантьяго Рамон-і-Кахаля. Вони мали взаємно-протилежні погляди на нервову структуру головного мозку в різних розглядах однакових знімків.

У XX столітті продовжувалося вдосконалення методології, що призвело до формування гістології в її нинішньому вигляді. Сучасна гістологія тісно пов'язана з цитологією, ембріологією, медициною та іншими науками. Гістологія розробляє такі питання, як закономірності розвитку та диференціювання клітин і тканин, адаптації на клітинному і тканинному рівнях, проблеми регенерації тканин і органів та ін Досягнення патологічної гістології широко використовуються в медицині, дозволяючи зрозуміти механізм розвитку хвороб і запропонувати способи їх лікування.


3. Методи дослідження

Методи дослідження в гістології включають приготування гістологічних препаратів з подальшим їх вивченням за допомогою світлового або електронного мікроскопа. Гістологічні препарати є мазки, відбитки органів, тонкі зрізи шматочків органів, можливо, пофарбовані спеціальним барвником, поміщені на предметне скло мікроскопа, укладені в консервирующую середу і покриті покривним склом.

3.1. Приготування гістологічного препарату:

Після забору матеріалу виконується його підготовка до дослідження, що включає в себе ряд етапів.

  1. Фіксація (від лат. fixatio - Закріплення) - фрагмент тканини обробляють за допомогою рідини-фіксатора, в ролі якого найчастіше виступає формалін, рідше - спирти, пікринова кислота та ін Така обробка запобігає розпад клітин і руйнування структури тканини під дією власних ферментів клітин і процесів гниття, таким чином зберігаючи прижиттєву структуру і роблячи можливим вивчення тканини. Принцип дії фіксуючих рідин заснований на швидкій загибелі клітин та коагуляції білка. Найбільш поширений тип фіксації - Іммерсійна фіксація (від лат. immersio - Занурення), при якій фрагмент тканини цілком занурюється в розчин; в експериментальних умовах також використовують перфузійну фіксацію (від лат. perfusio - Вливання), при якій фіксатор вводять через судинну систему. [1] При цьому використовують як технічний формалін (марка ФМ ГОСТ 1625-89), так і підготовлений ("забуференной" формалін), який відрізняється більшою стабільністю - не утворюється білий осад, властивий технічному формаліну при температурі нижче 40 С.
  2. Проводка - процес дегідратації (зневоднення) фрагмента тканини і просочення його парафіном. Цей етап забезпечує ущільнення тканини, яке, в свою чергу, необхідно для отримання зрізів (якщо тканина буде надмірно м'яким, то при мікротомірованіі вона буде "м'яти", утворюючи складки, розриви та інші артефакти, які роблять її непридатною до вивчення). Традиційно проводку здійснювали шляхом послідовного занурення тканини в розчини ксилолу і етилового спирту, [1] проте такий метод має ряд істотних недоліків, як-то: трудомісткість, тривалість (до чотирьох діб) [2], випаровування реагентів в повітря лабораторії (що небезпечно для співробітників лабораторії, так як ксилоли утворюють вибухонебезпечні пароповітряні суміші, викликають гострі та хронічні ураження кровотворних органів, при контакті зі шкірою - дерматити), [3] а також нестабільна якість одержуваної тканини, залежне від людського фактора, а саме дій лаборанта. Для вирішення проблем такого роду лабораторії використовують альтернативні реагенти, такі як ізопропанол, що є нетоксичним, а також апарати - гістопроцессори, що мають закритий контур і таким чином не допускають випарів у повітря лабораторії. Шляхом використання гістопроцессоров також можна значно зменшити час проводки в порівнянні з ручним методом (до однієї години при використанні гістопроцессора Xpress 120 [4]) за рахунок застосування вакуум-інфільтраційної і мікрохвильовою методик.
  3. Заливка - процес створення блоку, достатньо твердого, щоб бути придатним для різання ( мікротомірованія). Виконується шляхом заливання фрагмента тканини рідким парафіном, целлоидин, пластмасою або спеціальними середовищами для заливки. Потім залиту тканину остуджують до затвердіння блоку. Целлоидин в даний час практично не використовується; чистий парафін також має низку недоліків, які роблять його непридатним для дослідження - при його затвердінні утворюються кристали, які зменшують його обсяг на 5-10%, що, в свою чергу, веде до деформації тканини [5], а також через кристалічної структури він легко кришиться при різанні. Тому найчастіше для виготовлення блоків користуються спеціальними заливальним середовищами, які представляють собою суміш парафінів з присадками у вигляді рисового, бджолиного воску або полімерів. Ці присадки надають парафіну еластичність, що не дає йому кришитися при різанні. Щоб створити гомогенну середовище для заливки, віск і парафін розплавляють, охолоджують і ретельно перемішують, повторюючи всю процедуру 5-10 разів. Це досить трудомісткий процес, якість одержуваної середовища нестабільно, тому деякі лабораторії користуються готовими середовищами для заливки, виготовленими в заводських умовах і не вимагають додаткової гомогенізації.
  4. Різка, або мікротомірованіе, являє собою виготовлення тонких зрізів на спеціальному приладі - мікротоми. Товщина зрізів, призначених для світлової мікроскопії, не повинна перевищувати 4 - 5 мкм, для електронної - 50 - 60 нм.
  5. Фарбування зрізів дозволяє виявити структуру тканини за рахунок неоднакового хімічної спорідненості різних елементів тканини до гістологічних барвників. Наприклад, забарвлення гематоксиліном і еозином дозволяє виявити кислі структури тканини, такі як ДНК і РНК, за рахунок їх зв'язування з гематоксиліном, які мають лужну реакцію, і цитоплазму клітин, що зв'язується з еозином [6] (Основна стаття - забарвлення гематоксиліном і еозином). Перед фарбуванням виконується монтування зрізу на предметне скло. Для уникнення формування складок зріз після мікротомірованія поміщають на поверхню підігрітої води, де він розправляється, а потім вже на скло. Фарбування, як і всі інші стадії процесу виготовлення гістологічного препарату, може виконуватися вручну й автоматично. Розрізняють традиційне фарбування та імуногістохімічне.
  6. Висновок зрізів являє собою приміщення пофарбованого зрізу, монтувати на предметному склі, під покривне скло з використанням середовища для висновку, що має коефіцієнт заломлення, близький до такого у скла - канадський бальзам, полістирол, спеціальні середовища для висновку. Ув'язнений препарат можна зберігати досить тривалий кількість часу (виняток - при використанні полістиролу препарат поступово втрачає прозорість, а сам полістирол тріскається).

3.2. Основні методи гістологічного дослідження:

  • Світлова мікроскопія
  • Фазово-контрастна мікроскопія
  • Темнопольна мікроскопія
  • Інтерференційна мікроскопія
  • Поляризаційна мікроскопія
  • Люмінесцентна (флуоресцентна) мікроскопія
  • Ультрафіолетова мікроскопія
  • Електронна мікроскопія
  • Цітоспектрофотометрія
  • Радіоавтографія
  • Іммунноцітохіміческіе методи
  • Метод культури клітин
  • Мікроскопічна хірургія клітини

Цей текст може містити помилки.

Схожі роботи | скачати
© Усі права захищені
написати до нас
Рейтинг@Mail.ru